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Prezzi Hogan Collezione 2014 di mutazione In questo articolo mettiamo

Prezzi Hogan Collezione 2014

La recente espansione di studi sulla hypermutation può beneficiare di un modo veloce e semplice per misurare i tassi di mutazione. In questo articolo mettiamo a confronto i diversi modelli vettore retrovirale per il monitoraggio ipermutazione in vivo. Vettori retrovirali combinano un alto tasso di trasduzione con l'integrazione in siti casuali all'interno del genoma della cellula ospite, uniformando così gli effetti posizionali sul gene reporter. I vettori contengono un gene reporter con un prematuro codone di terminazione TAG; dopo aver recuperato, una proteina fluorescente full-length è espresso. Ogni singola mutazione puntiforme al codone amber attiva il reporter, tranne la transizione da G ad A, che crea solo il codone di stop TAA. Nel costrutto, il gene reporter è seguito da un sito di entrata del ribosoma interno e un secondo marcatore che consente la selezione delle cellule trasdotte stabilmente. Come un gene reporter, abbiamo testato la fluorescenza proteine ​​verde e giallo (GFP e YFP); e varie proteine ​​con fluorescenza rossa (DsRed). Il secondo indicatore era o un gene di resistenza farmacologica o una seconda Hogan Saldi Estivi 2014 proteina fluorescente. Abbiamo anche introdotto diversi elementi enhancer cis-acting nel costrutto giornalista, di studiare l'attività simultanea di esaltatori di trascrizione e hypermutation. Abbiamo trovato che GFP come reporter, in combinazione con un marcatore di selezione della droga, dato le misurazioni dei tassi di mutazione più coerenti e convenienti. DsRed è una buona alternativa alla GFP, ma varianti con maggiore intensità di fluorescenza sono necessari se combinata con misure di fluorescenza verde. Confermiamo, inoltre, che nessuna sequenza specifica immunoglobulina è necessaria per hypermutation bersaglio. A seconda della loro posizione in questi costrutti ectopica Prezzi Hogan Collezione 2014 espresso, esaltatori possono avere effetti positivi o negativi sulla hypermutation.
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